空中花粉捕集マニュアル

更新日:平成30年7月27日

1 花粉の捕集

 重力降下を利用した空中花粉の捕集法(重力法(gravity method))であるダーラム(Durham)型捕集器を用いる。

ダーラム型自動花粉捕集器ダーラム型捕集器

ダーラム型捕集器
直径 23センチメートルのステンレス円盤2枚が高さ7.6センチメートルの支柱3 本に支えられ、中央にスライドホルダーが下部の円盤より2.5センチメートル の位置に設置されたもの

○ 花粉捕集器の設置

下記の条件に適合する保健所屋上に設置。

  • 風の通る場所
  • 容易に行き来できる場所(捕集用スライド交換を毎日容易に出来るところ)
  • 10メートルから20メートル四方にスギ、ヒノキがない場所(地上1メートルから20メートルでは、捕集効率に影響はないと言われている)
  • 捕集器は、しっかり固定する。
  • 捕集器は、原則として移動させない。

 ○ 捕集用スライドグラスの作成

 事前に調査期間中に必要な枚数のスライドグラス(ワセリン塗布)を作成し、スライドグラスケースに保存しておく。

花粉捕集用スライドグラス(ワセリン塗布)の作成(フロストスライドグラスを使用する)

 白色ワセリンをスライドグラスに薄く塗布し作成する。

  • 作成したスライドグラス同士を摺り合わせ、ワセリンによる摩擦感覚が無くなる手前まで薄くする。
  • ワセリンを厚く塗布しないこと。薄くても花粉は、充分捕集できる。
    フロスト部分に、捕集日を鉛筆で記入(例:2月1日から2月2日)

2 気温の測定

○ デジタル式最高最低温度計の設置

 花粉捕集器と同一場所に設置する。

3 花粉の計測

1. 24 時間設置したスライドグラスの回収 (運搬用スライドグラスケースにて) …注1

  捕集器へのセット期間:前日の朝9時30分から当朝9時30分(24 時間)

      

2. 染色・標本作成 …注2
3. 鏡検:同定とカウント …注3
4. 記 録(所定の記録用紙にカウント数を記入)…注4
5. スライドグラスの保存 (日付順にスライドケースに保存)



(注1)
  1. ワセリン塗布済みのスライドグラスを運搬用スライドケースに移して搬送し、捕集器にセット(回収も同様)
  2. 雨でスライドグラスが濡れているときは、自然乾燥させてから染色する
  3. 肉眼で見えるゴミは、針先、ピンセットなどで除去する
  4. 開庁日は、毎日回収する(24 時間設置)。閉庁日については、茨木保健所はダーラム型自動花粉捕集器で対応するが、藤井寺・泉佐野保健所は、連続設置とし、データは設置日の平均とする。

(注2) 染色は、A:カルベラ液、B:ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリーの両者を併用する。

A:「カルベラ液」
  Gvグリセリンゼリーに比べ染色時間が早い、しかし保存が利かない。

<組成>

グリセリン          5ミリリットル
 95%エチルアルコール   10ミリリットル
 蒸留水           15ミリリットル
 飽和フクシン溶液     2滴

<飽和フクシン溶液の作成方法>

 塩基性フクシン11グラムを乳鉢に入れ、95パーセントエチルアルコール100ミリリットルを
徐々に加え、つぶしながら溶かし濾過する。

カルベラ液の染色方法
 スライドグラスに、カルベラ液を適量(液がはみ出さない量)滴下しカバーグラス(18ミリメートル×18ミリメートル)を被せて鏡検。

花粉は、赤色に染まる。

B:「 Gv(ゲンチアナバイオレット)グリセリンゼリー」
  花粉の染色と封入が同時に行い、標本を保存できる利点がある。

<組成>

 ゼラチン 10グラム
 グリセリン 60ミリリットル
 蒸留水 35ミリリットル
 0.1%Gvアルコール溶液 1ミリリットル
 液状フェノール 0.5ミリリットル

<調製法>

 ゼラチン、グリセリン、蒸留水をビーカーに入れ水浴中で緩く撹拌しながら溶解する。
 これに、Gvアルコール液と液状フェノールを加えて混和後、シャーレなどに入れて固め保存する。

ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリーの染色方法
 カバーグラス(18ミリメートル×18ミリメートル)の中央部分に、Vg(ゲンチアナバイオレット)グリセリンゼリーの小片(カバーグラス全体に広がる量)を載せ、バーナーの遠火で徐々に加温溶解させ、染色液がはみ出さないようスライドグラスに被せる。(この時、スライドグラスも暖めながら行うと、染色液の延びが良く少ない染色液量で済む。量が多いと標本が厚くなり鏡検しにくく、カバーグラス外にはみ出す量が多くなる。)

花粉は、青紫色に染まる。


(注3)

  1. カバーグラス全面積の花粉を同定しながら、数取器で計測する。

  2.  染色液がカバーグラスからはみ出した部分にある花粉は、すべて計測する。ただしこの部分の花粉数は、2分の1量として合計する。

  3.  通常、倍率100 倍でカウントする。

  4.  判別の困難な場合は、倍率を上げて確認する。また、サンプル標本も参考とする。


(注4)

  1. 飛散量の報告は、1平方センチメートルあたりに換算する。 (小数点以下1桁まで記録する)
    ( 計測数÷3.24=報告数 3.24・・・・1.8×1.8)
  2. 飛散開始日の条件:はじめて2日以上1個以上/平方センチ観測された最初の日とする。
    飛散開始日以外に初観測日を記録する。(はじめて小数点以下1桁の数が認められた最初の日)
  3. 飛散終了時期の条件:飛散終了時期に3日間連続して0個が続いた最初の日の前日とする。
  4. データの表示 
    (例)3 月3 日に計測したデータは、「3 月2 日」の飛散量とする。
    3 月3 日に計測したデータは、3 月2 日朝にスライドグラスを設置し3 月3 日朝までの期間の捕集であること。また花粉はほとんどが昼間に飛散することから、計測した花粉量は 3 月2 日に飛散した花粉であることによる。
  5. 閉庁日のデータの取り扱い
    閉庁日のデータが平均値として算出されたものである場合は、その旨を明記したうえ、データをホームページに公開する。

花粉の光学顕微鏡写真像(ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリーによる染色)

スギ花粉の光学顕微鏡写真像(ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリー染色)
スギ花粉
大きさ30から40マイクロメートル
パピラという鈎状の突起部がある

ヒノキ花粉の光学顕微鏡写真像(ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリー染色)
ヒノキ花粉
大きさ25から35マイクロメートル
球状で星状の内容物が見える

ヤシャブシ花粉の光学顕微鏡写真像(ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリー染色)
ヤシャブシ花粉
大きさ25マイクロメートル前後
多角形で近畿圏では六甲山系に多く植林されている
マツ花粉の光学顕微鏡写真像(ゲンチアナバイオレットグリセリンゼリー染色)
マツ花粉
大きさ50マイクロメートル前後
両端に2個の気嚢と呼ばれる空気袋がある

このページの作成所属
健康医療部 健康医療総務課 保健所・事業推進グループ

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